RT-PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成一鏈cDNA的反轉(zhuǎn)錄，以及后續(xù)的PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。本試劑盒選用優(yōu)異的M-MLV RT酶，可以合成大于5kb的一鏈cDNA；反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測(cè)等分子生物實(shí)驗(yàn)。
RNA濃度和純度分析：
濃度計(jì)算：對(duì)于單鏈RNA，OD260＝1.0時(shí)，RNA濃度為40μg/ml，稀釋時(shí)OD260＝0.1時(shí)，其RNA濃度為4μg/ml。
純度分析：純凈的RNA樣品其OD260/OD280的比值應(yīng)介于1.8-2.0。小于此比值說(shuō)明有蛋白或苯酚污染，如果比值大于2.0，則可能被異硫氰酸胍污染；OD260/OD230比值應(yīng)大于2.0，如果小于此比值說(shuō)明有小分子及鹽類(lèi)污染。
濃度測(cè)定：
使用RNA濃度測(cè)定儀，測(cè)定樣品A260和A280值。根據(jù)A260/A280比值，估測(cè)RNA質(zhì)量。一般A260/A280比值在1.8-2.0之間，可以滿足實(shí)驗(yàn)要求。在100μl RNA原液中取1μl稀釋至250μl（DEPC處理的水），測(cè)定樣品的A260和A280的值，按下列公式計(jì)算其濃度：
RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40（ng/μl）。
測(cè)定RNA濃度基本操作步驟：
1.取1μl RNA原液，放在0.5ml EP管中，加入249μl dd H2O，用移液槍反復(fù)混勻。
2.用dd H2O為空白對(duì)照，調(diào)節(jié)A260零點(diǎn)。
3.倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測(cè)定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液，用dd H2O沖洗比色杯，再調(diào)節(jié)A280零點(diǎn)。
4.倒掉比色杯中的水，加入稀釋并混合均勻的RNA樣液，測(cè)定A280值。計(jì)算A260/A280比值，比值≥1.8，滿足實(shí)驗(yàn)要求。
5.RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40（ng/μl）。
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更新時(shí)間：2024-03-14
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